Nội dung của bộ phim Ải Mỹ nhân xoay quanh chuyện "hậu cung", tranh giành đấu đá nhau giữa các bà vợ trong một gia đình quan lại giàu có. Từ khi trở thành bà Tư nhà Hội đồng Thanh (NSƯT Thanh Điền)  thì bà Tư (Dương Cẩm Lynh) không ngừng gây nên sóng gió. Sau khi tính kế hãm hại con riêng của Mai (Diệp Bảo Ngọc) và Lợi rồi vu oan cho Lụa (Thúy Diễm), bà Tư từng bước hãm hại đuổi bà Hai ra khỏi nhà.

Không chỉ vậy, bà Tư còn khéo léo lợi dụng triệt để những người cùng phe cánh với mình để phục vụ cho mục đích trả thù. Biết Bình (Huy Cường) luôn thầm thương trộm nhớ Lụa, bà Tư đã xúi giục Bình chia rẽ tình cảm của vợ chồng Sanh (Lương Thế Thành) và Lụa không ngừng khích bác, khơi gợi lòng thù hận trong Bình.

Với mưu sâu kế độc, bà Tư đã khiến cho đôi vợ chồng trẻ liên tục xảy ra chuyện xích mích. bà Tư lẻn cho thuốc vào chén rượu của Bình rồi đẩy đưa việc Lụa có chuyện muốn nói với anh tại chuồng củi. Bình tức tốc đến nơi tìm gặp Lụa trong lòng rạo rực không yên. Lụa vì thương cô hầu của mình bị Mai vu oan tội trộm đồ nên cũng tìm đến nhưng không ngờ đó chính là kế sách của bà Tư và Mai hòng làm cho Hai Sanh thấy cảnh “tình ngay lý gian”. Vốn hay ghen nên khi thấy vợ mình và anh cả trong chuồng củi, Hai Sanh đã giận dữ đánh cả hai người, Lụa ngất xỉu.

Và đang giữa lúc đỉnh điểm của hiểu lầm thì tin Lụa có thai làm Hai Sanh quên hết mọi chuyện. Hai Sanh nhảy cẫng lên vì biết mình sắp được làm cha, anh càng yêu chiều vợ nhưng Lụa thì vẫn còn giận vì cát tát vô lý mà anh dành cho cô. Tin Lụa có thai làm cả nhà vui mừng khôn xiết duy chỉ có Mai và bà Tư càng thêm tức giận, bà Tư lại mượn tay Mai để hãm hại đứa bé trong bụng Lụa nhằm diệt trừ hậu họa về sau.

Bà cố khơi lại chuyện Lụa làm mất con của Mai để mượn Mai ra tay với Lụa. Nhớ lại chuyện bị mất con, Mai tức tối đem thuốc vào nhà bếp để hạ độc làm Lụa sảy thai. May sao Lụa chỉ uống một ít nên hai mẹ con không nguy hại. Mai càng ngày càng ghen tức với Lụa và tuyên bố có cô thì không có Lụa.

Bà Tư cảm thấy không an toàn khi phát hiện các đồng minh của mình là Bình, Lợi, Mai đang câu kết với nhau chống lại mình. Bà Tư còn tìm cách lôi kéo bà Ba (Top 10 hoa hậu VN 2012 Trương Hải Vân) về phía mình để cô lập, hạ bệ quyền hành của bà Cả (Đan Thy) trong nhà.

Bà cả vô tình nghe được âm mưu của Mai và bà Tư, bây giờ thì mọi chuyện chuyện đã rõ nhưng bà không bứt dây động rừng mà đi từng bước một. Bà Tư cho người nấu thức ăn cho ông Thanh, ông Thanh bị khó thở, mọi trách nhiệm đổ lên đầu bà Tư vì cho mật ong vào chén đậu hũ. Bà Cả lớn tiếng mắng, bà Tư kêu oan nhưng ông Thanh xua đuổi bà Tư đi. Đó chính là kế sách của bà Cả, bà Tư hậm hực và quyết đấu với bà cả tới cùng.

Ải Mỹ Nhân do Xuân Phước làm đạo diễn, hội tụ dàn sao “khủng” của điện ảnh như NSƯT Thanh Điền, NSƯT Công Ninh, Dương Cẩm Luynh, Lương Thế Thành, Thúy Diễm, Thiên Hương, Diệp Bảo Ngọc, top 10 hoa hậu Việt Nam Trương Hải Vân, Huy Cường, Đan Thy…